PROFESSOR

PAULO CESAR

PORTAL DE ESTUDOS EM QUÍMICA
 

DICAS PARA O SUCESSO NO VESTIBULAR: AULA ASSISTIDA É AULA ESTUDADA - MANTER O EQUILÍBRIO EMOCIONAL E O CONDICIONAMENTO FÍSICO - FIXAR O APRENDIZADO TEÓRICO ATRAVÉS DA RESOLUÇÃO DE EXERCÍCIOS.

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QUÍMICA DO VINHO

 

"A penicilina cura os homens, mas é o vinho que os torna felizes."
FLEMING (1881-1945)

Uma parreira, luz solar e água: eis a uva. Agora some ao suco desta algumas leveduras, e... pronto: O VINHO. Nenhuma outra bebida é tão amada, discutida, estudada, e atrai tantos aficionados quanto o vinho.


O Portal de Estudos em Química tem o orgulho de apresentar, em um artigo especial, a mais famosa de todas as bebidas. O artigo mostra como a ciência Química tem uma participação importante na arte da elaboração da bebida dos deuses. Com vocês, a Química do Vinho!
 
Bebida SAGRADA
A palavra "vinho" aparece centenas de vezes no livro sagrado. Os grandes reis, os grandes profetas e até mesmo o filho de Deus eram consumidores de vinho: mesmo em sua última refeição, Jesus não deixou o vinho faltar.
Dois episódios podem servir como exemplo: a primeira menção do vinho na Bíblia e o primeiro milagre de Jesus:

>Noé bebum (a primeira aparição da palavra vinho)
Gênesis, 9 20-21
"Sendo Noé lavrador, passou a plantar uma vinha. Bebendo do vinho, embriagou-se e pôs-se nu dentro de sua tenda"

>Água em vinho (primeiro milagre)
João, 2 1-12
"(...)houve um casamento em Caná e ali estava a mãe de Jesus. Jesus também foi convidado, com seus discípulos. Tendo acabado o vinho, a mãe de Jesus lhe disse;'Eles não têm mais vinho!'. (...)Jesus lhes disse: 'Enchei de água os seis jarros', e os seventes as encheram. Então, Jesus determinou: 'Tirai agora e levai ao mestre-sala'. Tendo o mestre-sala tomado a água transformada em vinho, chamou o noivo e lhe disse: 'Todos costumam pôr primeiro o bom vinho e, quando já beberam fartamente, servem o inferior; tu, porém, guardaste o bom vinho até agora'

>Sábios provérbios
Provérbios
20,1 "O vinho é escarnecedor, é a bebida forte, alvoroçadora"
23,29 "E para quem as feridas sem causas, os olhos vermelhos? Para os que se demoram em beber vinho, para os que andam buscando bebida misturada"
 

Datar cronologicamente a história desta paixão entre homem e vinho não é fácil. Alguns historiadores supõem que o homem conheceu o vinho antes de aprender a cultivar as uvas, possivelmente desde que o gênero Vitis, que compreende todas as vinhas domésticas fez seu aparecimento na era Terciária. Entre as formações da era Terciária, encontram-se quarenta variedades de Vitis, e uma cepa fóssil de mais de cinqüenta milhões de anos. Arqueologistas aceitam acúmulo de sementes de uva como evidência de elaboração de vinhos. Escavações em Catal Hüyük na Turquia, em Damasco na Síria, Byblos no Líbano e na Jordânia revelaram sementes de uvas da Idade da Pedra (Período Neolítico B), cerca de 8000 a.C. As mais antigas sementes de uvas cultivadas foram descobertas na Georgia (Rússia) e datam de 7000 - 5000 a.C. (datadas por marcação de carbono).


 

Editor's Selection
Editor's selection
Entre fatos históricos e cientificamente comprovados, também não faltam lendas sobre o vinho. A mais citada de todas as lendas sobre a descoberta do vinho é uma versão persa que fala sobre Jamshid , um rei persa semi-mitológico que parece estar relacionado a Noé, pois teria construído um grande muro para salvar os animais do dilúvio. Na corte de Jamshid, as uvas eram mantidas em jarras para serem comidas fora da estação. Certa vez, uma das jarras estava cheia de suco e as uvas espumavam e exalavam um cheiro estranho sendo deixadas de lado por serem inapropriadas para comer. Eram consideradas possível veneno. Uma donzela do harém tentou se matar ingerindo o possível veneno. Ao invés da morte ela encontrou alegria e um repousante sono. Ela narrou o ocorrido ao rei que ordenou, então, que uma grande quantidade de vinho fosse feita e Jamshid e sua corte beberam da nova bebida.

eno-Glossário

ACIDEZ - Sensação de frescor agradável, provocada pelos ácidos do vinho como cítrico, tartárico, málico, lático, succínico e que são necessários para que, junto com o álcool e o tanino, o vinho possa envelhecer com dignidade.
ACIDEZ VOLÁTIL - Acidez desagradável provocada pelos maus ácidos do vinho (acético, propiônico e butírico).
ALCOÓLICO - com muito álcool, desequilibrado.
AMBIENTAR - (em francês CHAMBRER) deixar o vinho à temperatura ambiente, do recinto onde é servido.
AQUOSO - fraco, que teve adição de água.
ÁSPERO - com excessivas adstringência e acidez (esta um pouco menor).
AVELUDADO - macio, untuoso, viscoso com textura de veludo.
AVINAGRADO - com odor e sabor de vinagre, deteriorado, inutilizado para o consumo.
BUQUÊ - (do francês bouquet) - aroma complexo, também denominado aroma terciária, resultante do envelhecimento.
CHAPTALIZAÇÃO (do francês, "Chaptalization") - adição de açúcar durante a fermentação (proibida em alguns países).
FORTIFICADO - ao qual é adicionado aguardente vínica, como o vinho do Porto, o Madeira, o Jerez, o Marsala, o Banyuls e outros.
FRISANTE - efervescente, com pouco gás carbônico (menos que espumantes).
NEUTRO - sem caráter marcante.
OLEOSO – viscoso.
OPACO - turvo; velado; sem limpidez.
OXIDADO - que sofreu oxidação; envelhecido além do suportável; decomposto na cor (do dourado ao castanho para os brancos e do tijolo ao marrom para os tintos), no aroma (adocicado, cetônico, etc.) e no sabor (desagradável e apagado).
QUENTE - teor alcoólico alto.
TÂNICO - que tem muito tanino ou no qual o tanino sobressai; o mesmo que adstringente e duro.
TANINO - substância existente na uva e que confere a adstringência ao vinho.
VERDE - com acidez acentuada, mas agradável e refrescante.

Por mais raro que seja, ou mais antigo,
Só um vinho é deveras excelente
Aquele que tu bebes, docemente,
Com teu mais velho e silencioso amigo.
Mário Quintana

Poderia-se discorrer longamente sobre os fatos históricos que demarcam a estreita relação entre a cronologia humana e a elaboração de vinhos. Mas de certo, é que e vinho não teve que esperar para ser inventado: ele estava lá, onde quer que uvas fossem colhidas e armazenadas em um recipiente que pudesse reter seu suco.

 

"O Vinho é suco de uva fermentado", mas não se engane com a simplicidade que esta afirmação pode transferir para uma garrafa de vinho. Fosse somente isto e não se justificaria a paixão por tantos declarados a este líquido. O Vinho é único porque assim como as pessoas, não existem dois iguais.
Da mesma forma como eram declarados os quatro recursos da ciência e da natureza (fogo, água, ar e terra), o vinho também é produto de quatro elementos fundamentais:

Chateau du vin em Pessac/FR


- O Terroir (pronuncia-se terruar) - ou o local, solo, relevo onde a uva é cultivada;
- A Safra - ou o conjunto de condições climáticas enfrentadas pela videira;
- A Cepa - ou a herança genética, a variedade de uva;
- E enfim, o Homem - que cultivou e colheu as uvas, supervisionou a fermentação e demais etapas até o engarrafamento do vinho.

A pessoa responsável pelo processo de "fabricação do vinho", vinificação, é denominada de enólogo, e este é um profissional da química (está lá no rótulo o CRQ do enólogo responsável). A Química, como se vê, também está no Vinho.

 

"O vinho é composto de humor líquido e luz"
GALILEU GALILEI

 

A Vinificação

Pessac é uma cidade da grande BordeauxMatéria prima do Vinho, a "produção" da uva pelas videiras requer apenas água e sol. A luz solar transforma o dióxido de carbono da atmosfera em açucares, isto é feito nas folhas (a fotossíntese), que transferem este açúcar para o fruto; as raízes contribuem com a água para fazer o suco, minerais e outros elementos em pequenas quantidades.

Na sua forma mais básica, a fabricação do vinho é simples. Após as uvas terem sido espremidas, o levedo (pequeno organismo unicelular que existe naturalmente na vinha e, conseqüentemente, nas uvas) entra em contato com o açúcar do suco da uva e, gradualmente, converte esse açúcar em álcool. CO2 também é produzido neste processo exotérmico. Quando o levedo conclui seu trabalho, o suco de uva vira vinho. Quanto mais maduras e doces forem as uvas, maior será o teor alcoólico no vinho. Todo este processo é chamado de fermentação. Após a fermentação, o vinho pode (ou não) ser deixado maturar.

Bioquímica

AÇÚCAR (17g) ->
ÁLCOOL (1oGL) + CALORIAS (1,5 Cal) + CO2 (4 lit ou 4 atm)

 

Como o teor alcoólico do vinho é de 11 a 13oGL, temos:

 

187 - 221g de açúcar -> 11 a 13oGL de álcool + 44 - 52 litros CO2 + 16,5 - 19,5 Cal

-> 16,5 a 19,5 Cal equivalem a 30 - 34oC que são reduzidos para: 15 - 18oC nos brancos e 20 - 30oC nos tintos;

-> Nos espumantes a pressão é de 6 atm / litro, necessitando, portanto, de 25,5 g açúcar / litro e resultando em um acréscimo de 1,5oGL ao vinho.

Esta é a etapa na qual o vinho "reúne suas forças". A fermentação pode durar três dias ou três semanas, e o vinho pode maturar por dois meses, ou dois anos. O tempo dependerá da uva utilizada no processo e do vinho a ser obtido.

O vinho é definido pela O.I.V. (Office International de la Vigne et du Vin) como a bebida resultante da fermentação do mosto (suco) de uvas frescas. E portanto, qualquer outra bebida fermentada não obtida dessa forma não pode ser denominada vinho, como é o caso do assim denominado "vinho" de pêssego, ou de maça.

A fermentação é realizada por microorganismos do gênero Saccharomyces, destacando-se as espécies S. ellipsoideus (ou cerevisae ou vini), S. chevalieri e S. oviformis (ou bayanus). Neste processo bioquímico os microorganismos convertem moléculas de carbo-hidratos (açúcares) em álcool, gás carbônico e energia, conforme o esquema demonstrado ao lado.

Obviamente que o processo de vinificação dos vinhos de mesa: brancos, tintos, rosés, bem como vinhos de sobremesa e vinhos espumantes é diferenciado. O vinho branco, que é de fato amarelo, pode ser feito de uvas brancas ou, mais raramente, de uvas vermelhas. No segundo caso, o suco da uva deve ser previamente separado de suas cascas, pois lá estarão os pigmentos vermelhos. Vinhos tintos são feitos de uvas vermelhas ou azuladas, cujo suco (sempre incolor) é deixado em contato com as cascas destas uvas durante a fermentação. Assim, taninos são transferidos da casca para a uva. Estas espécies vão conferir cor acentuada ao vinho, bem como sabor. E o vinho rosé? Na vinificação deste o suco também é deixado em contato com as cascas de uvas tintas, mas por um período bem mais curto: algumas horas ao invés de dias e semanas como no caso dos tintos.

Vinho do Porto

O vinho do Porto é um dos melhores Vinhos Fortificados do mundo. Sua "invenção" deve-se a uma das muitas guerras entre ingleses e franceses, e também a um conhecimento empírico de química. No final do século XVII, quando os ingleses não podiam obter vinhos franceses, eles se viram obrigados a importar vinhos de Portugal. A fim de garantir a estabilidade dos vinhos durante o transporte, conhaque foi adicionado ao vinho pronto. Já no século XIX, os produtores em Portugal passaram a fortificar seus vinhos durante a etapa de fermentação. Resultaram então vinhos de alto teor alcoólico e com açúcar residual. Naturalmente estavam utilizando o princípio de Le Chatelier, pois a adição de álcool, produto da fermentação, deslocava o equilíbrio para os reagentes, açúcares, interrompendo a fermentação. Detalhe: atualmente os franceses bebem três vezes mais Porto do que os ingleses.

Os Vinhos de Sobremesa, também denominados de Vinhos Licorosos, são aqueles que tiverem um teor alcoólico maior que 14oGL. Um famoso vinho espumante de BordeauxPara obter este alto teor, álcool é adicionado durante ou após a fermentação, e talvez o termo mais correto para designar estes vinhos, já que eles são consumidos antes ou depois das refeições, seja Vinhos Fortificados.

A vinificação dos Vinhos Espumantes, tem como principal diferença o fato do enólogo deixar na garrafa parte do dióxido de carbono produzido durante a fermentação. É claro que para produzir uma garrafa de um Champagne não é assim tão simples. O método denominado de Champenoise consiste na elaboração de um vinho base, ao qual é adicionado uma certa quantidade de açúcar refinado (24 g/L de vinho). Realiza-se assim uma segunda etapa de fermentação, desta vez na garrafa, onde estão presentes ainda leveduras e clarificante (geralmente bentonita). Durante o período (cerca de 3 meses) em que o vinho ficará na garrafa, esta será rotacionada periodicamente e sujeita a inclinações progressivas com o gargalo para baixo. Durante a fermentação na garrafa se formarão resíduos sólidos que se acumularão no gargalo. Para a retirada destes é realizado um congelamento do gargalo em solução refrigerante, e a abertura da tampa provoca a expulsão do cilindro de sedimentos pela pressão interna. Finalmente é adicionado o licor de expedição: vinho velho ou conhaque + açúcar e fechada a garrafa com rolha de cortiça.


 

PASSO a PASSO: Os processos na fabricação do vinho


Chateau em St. Emilion (FR)
1
Colheita

A colheita já é, na verdade, uma etapa posterior a várias outras etapas iniciais, como o preparo do solo, o controle de pragas nas videiras, a irrigação artificial, entre outras.

Na França, ao contrário do Brasil, as videiras não são plantadas em parrerais, com suportes: as videiras são como pequenos arbustros, que crescem livremente. Muitas delas, dependendo do chateau, são centenárias. Algumas tem mais de 500 anos! Existe uma relação entre a idade da planta e a qualidade do vinho: quanto mais velha, mais enraizada está a videira, e mais chance de sugar nutrientes do solo ela possui. Por consequência, melhor será a qualidade da uva.

Como a uva têm enorme influência sobre o sabor e qualidade do vinho, a colheita precisa ser feita no tempo certo. Uma colheita prematura resulta em um vinho aguado, com baixa concentração de álcool. Ja uma colheita tardia, produz um vinho rico em álcool, mas com pouca acidez. Tão logo a uva é colhida, passa-se à etapa seguinte: o esmagamento.


 

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2
Esmagamento

Outrora feito com os pés dos vinicultores, hoje é um processo mecanizado. Geralmente, as uvas são dispostas em um cilindro metálico perfurado, onde pás giram a mais de 1.200 rpm. No final, as cascas estão separadas das uvas, e se obtém uma grande "sopa" de suco, cascas e sementes. Dependendo do tipo desejado do vinho, opta-se por um diferente processo. Para a produção do vinho tinto, esta sopa é prensada por vários dias, e todo o conjunto é fermentado. Apos alguns dias, o suco é então separado. A parte solida que resta é chamada de pomace, e pode ser utilizada para o preparo de certos licores.
 

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3
Fermentaçao

Esta é a etapa mais importante e mais complicada de todo o processo. Saccharomyces cerevisaeAqui, os químicos sao vitais. Entre outros, é necessário um rígido controle da temperatura, supressão de microorganismos indesejados, presença adequada de bactérias de fermentação, nutrição adequada para estas bactérias, prevenção da oxidação, etc.. A escolha da bactéria adequada para o tipo da uva é fundamental, e motivo de discórdia entre vários enólogos. A mais comum é a Saccharomyces cerevisae, mas outras espécies deste mesmo gênero tambem tem sido vastamente utilizadas. Para cada ml do suco, utiliza-se uma população de cerca de 1 milhão de células de bactérias!

O controle da temperatura durante a fermentação alcoólica é necessário para (1) facilitar o crescimento das bactérias, (2) extrair os componentes de sabor e cor das cascas, (3) permitir o acúmulo de produtos laterais desejados, e (4) prevenir o extermínio das bactérias.

A temperatura ideal para a maior parte dos vinhos é de cerca de 25oC. Mas esta etapa raramente é iniciada nesta temperatura, pois a fermentação naturalmente eleva a temperatura do suco, e os vinicultores devem evitar que esta ultrapasse a marca dos 30oC, onde as bactérias morreriam. Hoje este controle é automatizado, sendo que as pipas metálicas contém sistemas de troca de calor, e todo o processo é termostatizado.

Vários fermentosO contato com o ar deve ser evitado, do contrário ocorreria a oxidação do vinho. Isto é feito pelo lacramento dos recipientes onde a fermentação é realizada e, algumas vezes, pela introdução de CO2. Apos a fermentação, adiciona-se pequenas quantidades de SO2 ou ácido ascórbico, como anti-oxidantes.

Apos a fermentação, o vinho é decantado e o líquido sobrenadante é então separado. O vinho esta pronto, então, para o segundo processo de fermentação.

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4
Fermentação malolática

Esta etapa é bastante executada na europa, sobretudo na França. No Brasil, entretanto, os vinicultores não dão, ainda, muito valor para esta fermentação.


O ácido malônico é transformado em

ácido lático. O processo provoca a liberação de

gás carbônico


Há muito tempo se sabe que, mesmo finda a fermentação alcoólica, observa-se a evolução de dióxido de carbono do vinho. Há poucos anos, químicos descobriram que esta segunda fermentação se devia a ação de enzimas sobre o ácido malônico, presente no vinho, e a sua transformação em ácido lático. Neste processo, vários agentes de sabor, muitos ainda não estudados, são formados. Este processo produz um sabor diferenciado ao vinho; por isso, também, os vinhos franceses são tão diferentes dos demais.
Esta etapa é extremamente caprichosa: se a fermentação for excessiva, os vinhos ficarão aguados, baixos em acidez, e ricos em diacetilas, que podem até mesmo ser tóxicas, quando em excesso. Um grande controle é feito, através de leituras da composição por cromatografia. Quando o ácido malônico atinge um certo patamar; adiciona-se SO2 para inibir esta fermentação.

Um excelente artigo sobre o tema foi publicado em 1999 por pesquisadores da Faculté d'Oenologie, da Université Bordeaux 2. Gilles de Revel (veja, adiante, entrevista com este enólogo) e seus colegas observaram que, além de influenciar decisivamente no sabor do vinho per si, a fermentação malônica também auxilia a extração de componentes flavorizantes dos barris de carvalho. O artigo descreve as principais mudanças organolépticas ocorridas com o vinho que sofre a fermentação malônica. (Contribution to the Knowledge of Malolactic Fermentation Influence on Wine Aroma, J. Agric. Food. Chem., 1999, 47, 4003)


 

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5
Afinamento

Uma prática muito antiga, hoje é feita com requintes científicos. Envolve processos como filtração, centrifugação, refrigeração, troca iônica e aquecimento. Nesta etapa, o vinho é clarificado, grande parte dos produtos precipitáveis é extraída, e muitos íons metálicos, que tornam o vinho turvo, são retirados. É aconselhável deixar o vinho ambientar por algum tempo antes do consumo
O vinho que tomamos é, geralmente, transparente à luz. Mas não é desta forma que ele sai dos barris de fermentação. Muitas proteínas e complexos metálicos o deixam turvo, opaco. Entre as formas atuais de clarificação, encontram-se o uso de colunas de sílica, PVP ou caseína. Nos EUA, utiliza-se cufex, um produto que contém ferrocianato de potássio, para a extração de íons como o cobre e ferro. O uso de bentonita ajuda a remoção de proteínas.
Outro problema é o excesso de tartaratos, que podem precipitar, no vinho. O tartarato pouco solúvel é o de sódio; por isso, modernas vinícolas utilizam um processo familiar aos químicos, o de troca iônica, onde os íons sódio são substituídos por potássio, gerando um tartarato mais solúvel.
Finalmente, o vinho passa por uma pasteurização, onde é aquecido subitamente até cerca de 80oC e então resfriado. Alem de acabar com as bactérias restantes, o método auxilia na precipitação das proteínas que por ventura estiverem no vinho.

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6
Envelhecimento

Muitos vinhos tem o sabor melhorado se armazenados por alguns anos. Durante este tempo, a acidez diminui, varias substâncias pouco solúveis acabam precipitando e vários componentes formam complexos afetando o sabor e odor. Uma das formas de envelhecimento mais clássica é a feita em barris de carvalho. Estes barris são porosos, e permitem a entrada de oxigênio e a saída de água e álcool. O vinho tambem extrai componentes da madeira, que influenciam no aroma final. A cada nova safra, os barris devem ser totalmente renovados, do contrário ocorreria a proliferação de fungos ou outros microorganismos indesejáveis.
Vários artigos recentes descrevem o efeito do envelhecimento sobre a composição química do vinho, mas pouco se sabia até alguns anos atrás. O vinho é um excelente meio reacional e, durante o envelhecimento, várias reações químicas podem ocorrer. Entretanto, mais de 90% de todo o vinho consumido no mundo sofre apenas 2 anos de envelhecimento. No Brasil, esta prática não é comum, e os vinhos sao engarrafados pouco tempo após a fermentação.

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7
Engarrafamento

Antes de ser engarrafado, o vinho ainda passa por algumas etapas, que visam corrigir o pH, a cor ou concentração de O2 dissolvido. Muitas vezes, as garrafas são saturadas com CO2 antes de receberem o vinho. EngarrafamentoNa França, as garrafas sempre são novas e nunca reutilizadas, para evitar a contaminação do vinho por microorganismos estranhos. A garrafa é, em geral, escura, para evitar a fotoindução da oxidação do vinho.
A rolha é muito importante: precisa ser de boa qualidade, senão pode alterar drasticamente o sabor do vinho. Mesmo se utilizando uma excelente rolha, muitos componentes desta acabam sendo extraídos pelo vinho; o mais comum e mais estudado é o 2,4,6-tricloroanisol. J.M Amon e colegas relataram, em um trabalho recentemente publicado, que cerca de 65% dos vinhos contém este composto. Um método para a quantificação desta substância, via cromatografia e espectrometria de massa, foi desenvolvido por Thomas Evans e colegas do Departament of Viticulture and Enology, da University of California (Journal of Chromatography A, 786 (1997), 293)

 

A Enologia


Na universidade de Bordeaux 1 situa-se uma das mais reconhecidas escolas de enologia. Extremamente multidisciplinar, anualmente formam-se centenas de mestres e doutores na ciência do vinho.

 

Antes do século 19, pouco se sabia sobre o processo de fermentação da uva ou do processo de deterioramento do vinho. Tantos os gregos como os romanos bebiam todo o seus vinhos logo no primeiro ano apos o preparo, pois não haviam técnicas para a conservação eficaz. Eles costumavam adicionar flavorizantes, como ervas, mel, queijo ou até mesmo sal, para disfarçar o gosto do vinagre. Com os vinhos descritos no velho testamento, acontecia a mesma coisa: o consumo deveria ser mais rápido do que a sua deterioração.

No século 17, com a invenção do saca-rolhas e com a produção em massa de garrafas de vidro, os vinhos começaram a ser armazenados por vários anos.

Louis Pasteur

Nasceu no dia 27/12/1822 em Dole (Jura/FR). Entre várias descobertas, destaca-se a teoria de que as doenças são causadas por germes - uma das mais importantes em toda a história médica. Esta descoberta foi o pedra fundamental da microbiologia.

"Existe mais filosofia em uma garrafa de vinho que em todos os livros."
PASTEUR (1822-1895)

Mas foi somente na metade do século 19 que a produção do vinho ganhou requintes científicos: o químico francês Louis Pasteur explicou a origem química da fermentação e identificou os agentes responsáveis por este processo. Ele tambem inventou um método para matar a bactéria responsável pelo deterioramento do vinho, que hoje é chamado de pasteurização. Com o passar dos anos, mais a ciência se adentrou na vinicultura: houve avanços na fisiologia das plantas, nos conhecimentos de patologias das videiras, e mais controle do processo de fermentação. Logo, vieram os tanques de aço inoxidável, que além de poder serem limpos facilmente tambem permitem controlar a temperatura do vinho sem dificuldade.

Hoje, a química esta presente em todas as etapas: diariamente, alíquotas do líquido fermentado são colhidas e analisadas em cromatógrafos; o solo onde as videiras são plantadas é minuciosamente preparado com aditivos químicos; sabe-se exatamente que tipo de substâncias podem se desprender do barril ou das rolhas e influenciarem no sabor do vinho; sabe-se quando o vinho está pronto pela sua assinatura química em um GPC.

 
Polifenóis no vinho

trans-resveratrol

cis-resveratrol

miricetina

ácido gálico

ácido caféico

cromatograma
Entre os vários polifenóis presentes nos vinhos tintos, encontram-se os ilustrados acima. No cromatograma, cada pico de eluição corresponde a um dos polifenóis.

Fenóis e Seus Benefícios à Saúde

A presença de antioxidantes em nossa dieta reduz a incidência de doenças do coração e câncer. É sobre este tema que se baseiam muitos dos estudos sobre a estreita relação entre vinho e saúde.

Os estudos relacionados aos benefícios do consumo moderado do vinho à saúde parecem ser unânimes em afirmar que o vinho é a bebida alcoólica mais eficaz na redução dos riscos de mortalidade por doenças do coração. As substâncias fenólicas (polifenóis e flavonóides) que contribuem nas propriedades sensoriais do vinho são as responsáveis pelos benefícios. Ao polifenol chamado de transresveratrol são atribuídos os maiores benefícios, especialmente no que diz respeito à formação do colesterol HDL. O resveratrol é estrogênico, e por isso poderia substituir o estradiol ao manter a proliferação de certas células do câncer de mama que necessitam estrogênio para crescer. O resveratrol é um potente antiinflamatório e por isso seu efeito anticancerígeno, permitindo ao organismo bloquear a produção de certas substâncias químicas, conhecidas como prostaglandinas, que têm sido relacionadas a transformações de lesões pré-cancerosas em lesões malignas.

Um artigo na revista Science, publicado em 1997, descreveu os mecanismos pelos quais o resveratrol pode ser considerado anticancerígeno (M. Jang et al., Science 275 (1997), 218). O resveratrol inibe eventos celulares associados com a iniciação, promoção e progressão de tumores cancerígenos. O composto também atua como um antimutágeno e tem propriedades fungicidas. Este composto já foi encontrado em 72 espécies vegetais, sendo que muitas delas fazem parte da dieta humana. No caso das variedades vinifera, a síntese do resveratrol ocorre na casca da fruta - uma arma da planta, talvez, contra o ataque de fungos. 


 

Composição do Vinho
 

>ÁGUA : 85 - 90%;
> ALCOÓIS
7 - 24%:

Etanol (72-120 g/L)
Glicerol (5 -10 g/L)
Outros álcoois (Metanol, isopropil, etc)
> ÁCIDOS
1 - 8%(Total de 5-7 g/L)
(V = Voláteis; F= Fixos)
PROVENIENTES DA UVA:
- Tartárico : 50-90% (F)
- Málico : 10-40% (F)
- Cítrico : 0-5% (F)

PROVENIENTES DA FERMENTAÇÃO:
- Succínico (F)
- Lático (F)
- Acético (V)
- Butírico (V)
- Fórmico (V)
- Propiônico (V)
- Carbônico (V - nos espumantes = ± 0,5 g/L)

> AÇÚCARES
0 - 15%
- Glicose (na uva:7-15%)
- Frutose (idem)
- Outros (Xilose e Arabinose)

Obs.: Legislação Brasileira: Teor de açúcar p/ secos: < 5g/L; meio secos: 5 a 20 g/L; suaves e doces: > 20 g/L.
> FENÓIS
- Taninos
- Antocianinas
- Flavonas
- Outras (fenóis ácidos, etc.)

Obs.: Total de substâncias fenólicas: nos brancos < 350 mg/L, nos tintos até 3.000 mg/L.
> OUTRAS SUBSTÂNCIAS
- Aldeídos: Acetaldeído
- Ésteres: provenientes dos ácidos acético, tartárico e málico
- Vitaminas: A, C, B1, B2, B6, Biotina, Niacina, Inositol e Ác. Pantotênico
- Amino- ácidos: alan, argin, glic, cistid, leuc, isoleuc, prol, metion, lis, ser, treon, tiros, valin, fenilalan e aspart
- Sais minerais: Na, K, Cl, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Cr, Si, I, B, Mo, Ti, V.
- Conservantes: P-V (SO2 ou anidrido sulfuroso ou metasulfito), P-IV (sorbato de potássio).

Vinho: o que há na garrafa?

Existem virtualmente milhares de compostos químicos diferentes dentro de uma simples garrafa de vinho, pertencentes às mais distintas classes químicas. Muitos já são conhecidos pela ciência, mas ainda há bastante a ser estudado. A função de cada composto nas propriedades organolépticas e físico-químicas do vinho é tema de estudo para os enólogos.
Abaixo, apresentamos um pequeno resumo das principais classes de compostos presentes no vinho.

 

Ácidos Graxos

Os ácidos graxos no vinho têm origem nos firmes tecidos das uvas. Entretanto, a maior parte é formada durante a fermentação alcoólica, uma vez que ácidos graxos podem ser liberados pelos fermentos, como descreve o artigo de E. Pueyo et al., publicado em 1989 no American Journal of Enologie and Viticulture (Am. J. Enol. Vitic. 40 (1989) 175). Estes compostos ocorrem, no vinho, de duas formas: livres (Cn, onde n é o número de carbono da cadeia alquílica do ácido) ou ligados, principalmente sobre a forma de etil ésteres, uma vez que etanol é o álcool mais abundante neste ambiente (CnE: éster etílico de um ácido graxo).

 


Fração de cromatograma de uma amostra de vinho. Os picos representam diferentes ácidos graxos
(Journal of Cromatography A 776 (1997) 283)


Os ácidos graxos contribuem muito para o sabor do vinho: os ésteres diretamente, pois possuem fortes aromas e odores característicos; os ácidos livres, indiretamente, como precursores de aldeídos e alcoóis de seis carbonos, que possuem sabor herbáceo. Não obstante, os ácidos graxos contribuem para a estabilização e formação da espuma em vinhos espumantes.

 

 

Amino-ácidos + compostos carbonílicos

Os aminoácidos representam a mais importante forma de compostos nitrogenados nos vinhos. Devido ao seu caráter polifuncional, os amino-ácidos possuem uma grande reatividade química com respeito a compostos carbonilados - particularmente com açúcares, de acordo com a reação de Maillard. Este reação leva a compostos alfa-dicarbonílicos, que são frequentemente encontrados no vinhos após as fermentações alcoólica e malonática. Nos vinhos, estes compostos estão em equilíbrio de oxiredução, isto é, com suas formas alfa-hidróxi-cetonas e alfa-dióis.

Odores provenientes de amino-ácidos +
compostos alfa-dicarbonílicos
substratos produtos da reação odor no vinho
cisteína +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
H2S, dissulfeto de carbono, pirazina, metanotiol,
trimetiozazole, 2-metil-tiazole
ovos podres, enxofre, defumado, torrado, nozes, pipoca
metionina +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
 
metanotiol, dissulfeto de dimetila, metional batata e repolho
valina +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
 
2-metil-propanal queijo
leucina +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
3-metil-butanal amílico
iso-leucina +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
2-metil-butanal frutas

fenilalanina +
glioxal, diacetil ou 2,3-pentanodiona
benzaldeído, fenilacetaldeído floral
(Gilles de Revel et. al., J. of Agric. Food Chem. 48 (2000) 3761)

Os amino-ácidos têm grande importância no sabor do vinho, além de atuarem como precursores de diversos outros compostos também flavorizantes. A formação destes produtos depende muito de diversas variáveis as quais o vinho pode ser submetido, como pH, temperatura, concentração de dióxido de carbono, exposição ao oxigênio e tempo de envelhecimento. A cisteína - um dos amino-ácidos sulfonados, leva à formação de heterocíclos como pirazinas, metil-tiazoles, acetil-tiazolidina, entre outros, que contribuem largamente para o sabor final do vinho: estes compostos agregam aromas como o de pipoca, nozes, defumado e enxofre. Por isso o controle rigoroso da quantidade de amino-ácidos e os caminhos metabólicos sofridos por estes no processo da fabricação do vinho é extremamente importante, pois um descontrole levaria a perda de qualidade olfativa da bebida.

 

Carbo-hidratos

É natural de se esperar encontrar, no vinho, muitos carbo-hidratos, afinal ele é feito a partir de um vegetal. E, de fato, existem muitas substâncias desta classe na bebida: tanto sacarídeos como poli-sacarídeos, tal como a celulose, hemicelulose e xiloglucana. Existem, ainda, glucosídeos ou poli-sacarídeos peptídicos, como a homogalacturonana. Hewitt et al. publicaram um artigo, ainda em 1956 (Food Tech. Oct. (1956) 487), descrevendo os glucosídeos como uma fonte potencial para compostos flavorizantes: embora não tenham odor, podem vir a liberar, mediante ação enzimática, alcoóis e açúcares que contém odor e aroma característicos.
 


(K.M. Hemingway et al., Carbohydrate Polymers 38 (1999) 283-286)


Um exemplo é a hidrólise de um dos glucosídeos encontrados na uva - o neril-b-D-glucopiranosídeo, que leva à formação de uma molécula com um odor muito intenso, o nerol. A hidrólise dos glucosídeos podem ocorrer em várias etapas do processo: na maturação da uva, durante a fermentação, no envelhecimento do vinho ou, ainda, durante o consumo: uma grande quantidade de glucosidases foram encontrados na saliva, derivadas da microflora da boca (Nakamura et al., J. Periodontal Res. 18 (1983) 559).

Mono-terpenos

Vários estudos sugerem que boa parte da expressão sensorial do bouquet do vinho se deve à presença de compostos terpenóides. Além disso, a relação entre as quantidades de cada terpeno em um vinho pode servir como pista para se descobrir a variedade da uva utilizada. Hoje, conhecem-se cerca de 50 monoterpenos que, comumente, aparecem nos vinhos. Os mais abundantes (principalmente para vinhos feitos com uvas Muscat) são o linalol, geraniol, nerol alfa-terpineol e citronelol. Os terpenos pertencem ao constituintes secundários das plantas, e sua bio-síntese começa com a acetil-coenzima A (CoA). Estes compostos não sofrem alterações durante as fermentações no vinho: portanto eles são, de fato, uma assinatura de sabor ao vinho que vem da variedade de uva escolhida.

Alguns dos mais abundantes
mono-terpenos no vinho

citronelol

geraniol

 

linalol

terpineol


Na uva, os terpenos estão principalmente nas cascas e, na maioria das vezes, ligados covalentemente a açúcares - como o caso do nerol, anteriormente visto. Muitos terpenos, mesmo após findo todos os processos da fabricação do vinho, permanecem, ainda, ligados a estes açúcares. Nesta forma, os terpenos são inodoros e insípidos. Atualmente, vários pesquisadores do mundo inteiro estão estudando as etapas das hidrólises destes glucosídeos para passarem a controlar a liberação destes terpe-nos, no vinho, ao seu bel prazer.
 

Detalhes... importantes!

Nem só a qualidade da uva ou o controle no processo de fermentação pode ter influência sobre o sabor do vinho. Muitos outros detalhes são também extremamente importantes. Entre eles, a qualidade do barril onde ele é envelhecido e da rolha que tampa a garrafa.

A Rolha

Alguns vinhos perdem sua qualidade pela influência de uma rolha de má qualidade que pode estar contaminada por fungo, ou ressecada. Por este motivo, ainda que a rolha de cortiça (de boa qualidade) seja considera a parceira ideal das garrafas da nobre bebida, isolando completamente o líquido do oxigênio externo, sua substituição já é aceita por muitos. Várias são os estudos para o desenvolvimento de novos isolantes (materiais poliméricos são os mais empregados) para os vinhos. Um em especial chama a atenção: o emprego de rolhas de cortiça tratadas com enzimas. Estes estudos foram desenvolvidos pela mega empresa no ramo de enzimas, a Novozymes, em colaboração com uma empresa alemã. Rolhas são impregnadas com Subarase, uma fenol-oxidase, evitando assim a oxidação dos compostos fenólicos presentes no vinho.

Cerca de U$ 10 bilhões são perdidos, anualmente, devido a contaminação do vinho com substâncias provindas da rolha. Até 5% das garrafas sofrem este mal. Dentre os compostos mais frequentemente associados ao "mal da rolha", encontra-se o 2,4,6-tricloroanisol (TCA). Em um artigo publicado em 1989, Amon e seus colegas da Nova Zelândia analisaram centenas de amostras diferentes de vinhos e encontraram pequenas quantidades de TCA em 62% das garrafas (J.M.Amon et al. New Zealand Wine Indust. J. 4 (1989) 62). O TCA é introduzido nos vinhos por defeitos no fechamento da rolha. Os humanos são capazes de detectar a presença de TCA mesmo em concentrações da faixa de 2 ng/ml! Algumas empresas já estudam a substituição da famosa rolha de cortiça por protótipos de polímero - tal como o teflon. Porém, enófilos tradicionais discordam deste artifício.

 

O Barril

Todos sabem que os melhores vinhos são aqueles envelhecidos em barris de carvalho. Esta é uma evidência empírica - o vinho torna-se, de fato, mais "saboroso".

Mas qual é, de fato, a contribuição do barril para o sabor do vinho?

Esta dúvida também atingiu alguns químicos, que encontraram a resposta. Vários componentes do carvalho são extraídos, pelo vinho, durante o envelhecimento. Entre eles, os isômeros cis- das "oak lactonas", tal como o 4S,5S-5-butil-4-metil-4,5-di-hidro-2(3H)-furanona. Estes compostos conferem ao vinho um incremento nas tonalidades "coco", "baunilha" e "chocolate" de seu sabor. O interessante é que a adição, proposital, de isômeros trans- destes compostos diminui a qualidade palatativa do vinho.

 


vescalagina: R1=OH R2=H
castalagina: R1=H R2=OH

Entretanto, o barril também pode influenciar negativamente no sabor do vinho. Muitas vezes, a madeira com a qual o barril é feito, foi previamente tratada com compostos como ésteres de hexa-hidroxidifenoilas (HHDP), na intenção de protegê-la contra o ataque de fungos ou bactérias. Estes compostos conferem um sabor adstringente ao vinho, diminuindo a sua qualidade. Os dois HHDP mais abundantes são a vescalagina e a castalagina. Ambos são encontrados em muitos vinhos envelhecidos em barris de madeira. Por isso, muitas vinícolas preferem não arriscar e utilizam tanques de aço inoxidável.
 

 

"Agora que a velhice começa preciso aprender com o vinho a melhorar envelhecendo, e sobretudo, escapar do perigo terrível de envelhecendo virar vinagre."
DOM HELDER CÂMARA

AROMA DO VINHO

A química dos vinhos é foco de grande pesquisa, graças à complexidade dos aromas voláteis que contribuem para seu sabor e às variações que surgem a partir de diferentes tipos de uva, regiões e idades da bebida.

O artigo publicado em 2008, na revista científica Chemical Society Reviews, faz uma revisão sobre a importância dos constituintes voláteis e não voláteis do vinho, bem como as principais técnicas de análise química [1].

O sabor é uma combinação de modalidades sensoriais, cujo aroma é seu maior contribuinte em função da percepção retronasal. A tabela 1 mostra alguns atributos sensoriais relacionados ao sabor dos vinhos e, na figura 2, está representada a estrutura química de substâncias associadas a estes atributos.

  

Tabela 1: Modalidades sensoriais e substâncias que contribuem
para o sabor dos vinhos (adaptada da referência [1])

Modalidade sensorial

Atributo

Exemplo de compostos presentes no vinho

Gosto

Doce

Glicose, frutose

Ácido

Ácido tartárico

Salgado

Cloreto de sódio

Amargo

Catequina

Cheiro/aroma

Floral

Linalol

Sensibilidade química

Aquecimento da boca/calor

Etanol

Tato

Viscosidade

Glicerol, polissacarídeos

Adstringência

Taninos

Visão

Vermelho

Malvidina-3-glicosídeos

 


a)

b)

c) [Fonte da Figura] [4]

Figura 2: Exemplo de constituintes do sabor: a) linalol; b) ácido L-tartárico; c) cristais de tartarato ácido de potássio formados em rolha de vinho, os chamados diamantes de vinho

 

Embora um vinho comporte milhares de substâncias, apenas uma parte efetivamente contribui para a percepção sensorial de seu aroma. Além disso, este aroma complexo é derivado da uva, da fermentação pelas leveduras, das fermentações secundárias e do envelhecimento/estocagem.

Por exemplo, a fermentação por Saccharomyces cerevisiae leva a formação de álcoois como o etanol. Já uma segunda fermentação empregando Oenococcus oeni conduz à biacetila (2,3-butanodiona) (ver Novidades na Ciência da SBQ Rio), responsável pelo aroma amanteigado dos vinhos Chardonnay. Por sua vez, o armazenamento de um vinho em barris de carvalho introduz a β-metil-γ-octalactona contribuindo para um aroma amadeirado. Vinhos estocados em barris de aço inoxidável apresentam, portanto, propriedades sensoriais mais simples.

Ann C. Noble (Professora da Universidade da Califórnia, em Davis) desenvolveu uma roda com descritores de aromas [5], onde o arco central possui atributos mais gerais como “frutado”, “oxidado” e “terroso”, enquanto o arco mais externo expressa descritores mais precisos como, por exemplo, “ananás”, “uva” e “compota de morango” para o atributo frutado [6] (Figura 3). É possível associar algumas substâncias a atributos específicos de aromas presentes em certas variedades de vinhos (Tabela 2).

Figura 3: Roda dos aromas dos vinhos. [Fonte da Figura] [7]

 

Tabela 2: Substâncias odorantes segundo tipos de vinho ou uva e aromas característicos
(adaptada da referência [1])
Variedade
Odorantes característicos
Estrutura/Qualidade do odor
Cabernet Sauvignon, Sauvignon blanc, Cabernet franc, Merlot, Carménère
3-isobutil-2-metoxipirazina (IBMP)
Sauvignon blanc, Scheurebe
4-metil-4-mercaptopentan-2-ona
Shiraz
(-)-rotundona

Como os constituintes dos aromas dos vinhos são voláteis, a análise de seus componentes é realizada principalmente por cromatografia gasosa (CG). Antigamente, amostragem dos vinhos para análise era feira por destilação ou extração com solventes, porém hoje os métodos mais utilizados são (Figura 4):

Headspace, onde o vapor desprendido da amostra, que contém as substâncias voláteis de interesse, é capturado diretamente por seringas ou adsorventes.

[Fonte da Figura] [8]

Microextração em fase sólida (do inglês Solid Phase Micro Extraction, SPME), que faz uso de um adsorvente como sílica diretamente inserido no analito ou na forma de headspace e dispensa o uso de solventes.

[Fonte da Figura] [9]

Extração por adsorção em barra agitadora (Stir Bar Sorptive Extraction - SBSE), onde um agitador magnético confeccionado de material adsorvente é colocado na amostra e agitado por determinado período. O agitador é, em seguida, transferido para uma unidade (até mesmo um frasco com solvente puro), onde a dessorção permite a injeção do analito.

[Fonte da Figura] [10]

Figura 4: Métodos para amostragem dos vinhos

A detecção dos constituintes do aroma é realizada por cromatografia gasosa e duas técnicas são características nesta análise: a cromatografia gasosa bidimensional (CGxCG, mais recente), onde duas colunas ortogonais permitem melhor separação dos constituintes, tendo como base propriedades como volatilidade e polaridade; e a cromatografia gasosa acoplada a um detector olfatométrico (CG-O), onde a importância de cada composto para o aroma como um todo é reconhecida por um usuário que cheira o efluente da coluna através de uma saída de sniff (Figura 5b).

a) [Fonte da Figura] [11]

b) [Fonte da Figura] [12]

Figura 5: a) cromatograma bidimensional;
b) cromatógrafo contendo detector olfatométrico (CG-O)

Através da análise por CG-O, um odorante pode ser percebido mesmo que sua quantidade seja inferior ao limite de detecção das técnicas usuais de cromatografia, caso seu impacto sensorial seja grande. Além disso, compostos presentes em grande quantidade em uma amostra podem não contribuir significativamente para o aroma final.

O impacto de aromas isolados pode não refletir o aroma final em uma mistura de substâncias. Por isso, ensaios de reconstituição e de omissão de aromas, a partir de seus constituintes e nas quantidades encontradas nos analitos, são frequentemente realizados na análise dos vinhos. Pode-se ainda identificar substâncias que agem de maneira sinergística para um aroma.

O fenômeno de liberação de um odor após certos segundos de sua ingestão é chamado de efeito retroaromático. A explicação para este fenômeno é a transformação de precursores não-odorantes em compostos voláteis por ação da microflora da boca, que age como um reator químico. Por exemplo, o tioéter inodoro 1, presente no vinho, dá origem ao tiol odorante 2 (Esquema 1) [13].

Esquema 1: Transformação de S-conjugado de cisteína em composto volátil

Novas estratégias para estudos dos aromas dos vinhos são a genômica e a proteômica. Graças ao recente sequenciamento do genoma das uvas, a identificação de genes permite a comparação entre diversas variedades e o estudo da expressão de proteínas associadas à produção de terpenos, segundo os estágios de crescimento das uvas.

Finalmente, o sequenciamento do genoma humano pode também contribuir para uma melhor compreensão de fatores genéticos que influenciam as diferenças individuais na percepção do aroma dos vinhos.

  

Referências Bibliográficas

[1] Poláskšková, P.; Herszage, J.; Ebeler, S. E. Chem. Soc. Rev. 2008, 37, 2478.[CrossRef]

[2] Key, D. Now that's what you call a real vintage: professor unearths 8,000-year-old wine. The Independent, 28 Dez 2003. Disponível em: <http://www.independent.co.uk/news/science/now-thats-what-you-call-a-real-vintage-professor-unearths-8000yearold-wine-577863.html>. Acesso em: 30 janeiro 2009.

[3] Silveira, R., Cadê o Monteiro? Disponível em: <http://www.storm-magazine.com/novodb/arqmais.php?id=585&sec=&secn>. Acesso em: 30 janeiro 2009. =  

[4] Wine Diamonds no Flickr. Disponível em: <http://www.flickr.com/photos/abk-images/2407107820/>. Acesso em: 16 novembro 2008.

[5] Noble, A. C.; Arnold, R. A.; Buechsenstein, J.; Leach, E. J.; Schmidt, J. O.; Stern, P. M. Am. J. Enol. Vitic. 1987, 38, 143. [Link]

[6] Maia, D. G., Coisas dos Vinhos. Disponível em: <http://danielgoncalvesmaia.blogspot.com/2007/07/roda-dos-aromas-e-os-aromas-na-prova-ii.html>. Acesso em: 30 janeiro 2009.

[7] Maia, D. G., Coisas dos Vinhos. Disponível em: <http://danielgoncalvesmaia.blogspot.com/2007/07/roda-dos-aromas.html>. Acesso em: 30 janeiro 2009.

[8] Metrohm USA Inc. Disponível em: <http://www.brinkmann.com/products/titr_774_de.asp>. Acesso em 16 novembro 2008.

[9] SMI-LabHut Ltd. Disponível em: <http://www.labhut.com/products/autosamplers/autosampler_ht280t.php>. Acesso em: 16 novembro 2008.

[10] Anatune Intelligent Analytical Solutions. Disponível em: <http://www.anatune.co.uk/component/content/article/75-gerstelsbse.html>. Acesso em: 16 novembro 2008.

[11] Marriot, P., Comprehensive 2D Gas Chromatography — Making GC Separations Work Harder. Disponível em: <http://www.restek.com/aoi_editorial_A004.asp>. Acesso em: 16 novembro 2008.

[12] Alström, T., Beeradvocate. Disponível em: <http://beeradvocate.com/smack/archives/2007/07>. Acesso em 16 novembro 2008.  

[13] Starkenmann, C.; Le Calvé, B.; Niclass, Y.; Cayeux, I.; Beccucci, S.; Troccaz, M. J Agric Food Chem. 2008, 56, 9575. [CrossRef]

 

Aprofundando o Assunto

Sobre a técnica SBSE e sua aplicação na análise de fármacos em fluidos biológicos ver: Chaves, A. R.; Queiroz, E. C. Quim. Nova 2008, 31, 1814.[CrossRef]

                             

Sobre cromatografia ver: <http://en.wikipedia.org/wiki/Chromatography>. Acesso em: 04 fevereiro 2009.

 

Sobre CG-O ver: van Ruth, S. M. Biomol. Eng. 2001, 17, 121. [CrossRef]

 

E sobre outras análises de alimentos por CG-O ver:

        

- Análise de pitanga: Melo, R. M.; Corrêa, V. F. S.; Amorim, A. C. L.; Miranda, A. L. P.; Rezende, C. M. J. Braz. Chem. Soc. 2007, 18, 179. [CrossRef

- Análise de chocolate amargo: Counet, C.; Callemien, D.; Ouwerx, C.; Collin, S. J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 2385. [CrossRef

- Análise de bifes: Machiels, D.; Istasse, L.; van Ruth, S. M. Food Chem. 2004, 86, 377. [CrossRef]

  

Os beaujolais são vinhos que são bebidos muito novos, sem envelhecimento           Bônus
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